2016年7月22日，由生物谷主办的2016液体活检产业发展论坛在上海斯波特大酒店圆满闭幕。此次会议围绕着液体活检的市场、技术、临床应用和未来趋势展开深入探讨，吸引300余位与会人员、上百家企业媒体参与。

大会第一天，来自复旦大学中山医院检验科潘柏申主任做了题为“医学检验实验室自建检测方法的现状与期望”的精彩报告。着重介绍了医学检验实验室自建检测方法国外现状和监管，从对FDA监管的反对意见、对FDA监管的支持意见以及学术团体对LDT监管的建议三个方面阐述，最后提出我国医学检验实验室自建检测方法现状与期望，引出我国对于LDT的发展和科学监管模式的思考和未来发展的期望。来自上海交通大学的施奇惠教授为大家详细介绍了循环肿瘤细胞的快速鉴定与单细胞测序技术。

接着是来自知名企业的领导人分别是从不用角度为大家分享了液体活检技术及行业发展。其中，格诺生物（中国）有限公司董事长何伟博士针对时下火热的液态活检技术提出了“三足鼎立”的观点，包括循环肿瘤细胞技术、循环肿瘤DNA技术以及外泌体技术。燃石医学CEO汉雨生先生介绍了结合精准医学、液态活检和大数据如何塑造肿瘤行业的未来以及同时面临的挑战。元码基因CEO田埂博士做了《“四定”液体活检之——万分之一的梦想》主题分享：从游离DNA的生物学特性出发，对ctDNA的检测与药物反应、耐药跟踪、疾病残留的相关性进行了讨论，并对当前ctDNA的前沿技术做出总结。云健康总裁金刚博士做了“基于二代测序的肿瘤液体活检基因检测和临床应用”的报告，精准医学包含了多领域高度集成，生命科学、技术科学、信息科学、医学科学和流行病学，并介绍了基因测序仪的行业现状。易活生物科技有限公司创始人兼CEO廖玮博士介绍了无创精准基因检测技术，由科学到技术到工程到产品再到商业。

此外，本次会议还设置了项目路演环节，来自上海交通大学附属第六人民医院普外科的袁周教授介绍了液体活检在胰腺癌中的应用。来自大连医科大学的刘婷姣教授介绍了基于微流控芯片的外泌体分离检测及其在乳腺癌诊断和分型中的应用。南京芯维康生物科技有限公司的执行董事刘志安博士介绍了循环肿瘤细胞在肺癌个体化治疗中的临床应用开发。北京中科纳泰生物科技有限公司的陈金辉总监介绍了肿瘤捕手—-早期诊断液体活检技术。

我国当前液态活检产业局面火热，同时也面临着相当大的机遇和挑战，在技术和监管方面同样存在急需解决的问题，相信通过研究者们和业内领域专业人士的共同努力，液态活检产业的持续发展会给我们带来更多振奋人心的突破，为推动人类肿瘤事业进步提供强有力的支持！

液体活检技术是一种利用高通量测序技术来检测血液中小DNA碎片的新技术；而血液中这些碎片可能来自死亡的细胞，因此只要血液中存在“外来”DNA，如来自胎盘、肿瘤或者移植器官等的DNA碎片，都能利用液态活检进行检测。液态活检通过一种简单的血液检测可对遗传侵入进行定位、研究和监控，目前该检测的应用领域迅速增长。

最近来自英国癌症研究中心曼彻斯特理工学院的科学家们就对来自214名黑色素瘤晚期患者的364个样本进行了分析，通过全外显子组测序及有针对性的对循环肿瘤DNA进行检测，来监测患者对特定药物治疗的响应情况，同时还揭示了患者机体中产生耐药的基因突变，因此利用血液测试就可以为晚期黑色素瘤皮肤癌患者的复发提供早期预警。

本文中，生物谷小编就整理了液体活检的一些研究成果及进展情况。

【1】Lancet Oncol：液体活检，未来的通用癌症检查？

于2016年1月11日-15日在美国旧金山举办的JP摩根健康医疗年会上，一个名为Grail的生物技术公司发布公告称，将“通过血液筛查发现那些没有症状的早期癌症患者”，并计划在未来3年将肿瘤全面检测推广开来。TheLancet Oncology发表了一篇评论文章，分析了癌症液体活检尤其是血液ctDNA检测的未来发展及可能面临的问题，详情如下。

利用液体活检进行肿瘤检测并不是一个新的概念：其实，很多其他的公司也发展了以血液检测为基础的监控癌症发展或筛查高风险无症状个体的检测。不过，目前这些检测只关注特别的几个癌症类型，而不是通过基于循环肿瘤DNA（ctDNA）的单一检验来检查所有无症状的癌症。这个目标可能实现吗？这种检测对于癌症患者来说有哪些更广泛的意义？

【2】Cell：新型血检技术或可扩大液体活检的范围

当细胞死亡后，其并不会消失地无影无踪，相反其会以游离DNA的形式留下一下“指纹”痕迹，而在人类机体中，这些小型的DNA片段就会在血液中被发现；近些年来游离DNA的研究领域应运而生了一种称之为“液体活检”的新技术，该技术可以诊断并且监测某些癌症，鉴别出胎儿机体异常，并且评估移植器官的健康性，进行这些操作仅需要简单的抽血就可以完成，尽管这些检测潜力巨大，但目前其所检测的范围却非常有限。

发表在Cell上的一篇报道中，华盛顿大学的科学家就表示他们开发了一种新方法可以克服当前液体活检技术的局限性，从而就以帮助鉴别出哪些类型的细胞可以产生游离DNA；这种方法可以扩大液体活检的检测范围，其依赖于对个体机体中游离DNA的片段谱系进行分析，同时将这种谱系信息同细胞多种死亡生理条件进行对比。

【3】Liquid Biopsy液体活检点名：CTC 循环肿瘤细胞，ctDNA 循环肿瘤DNA

血液，你会想起什么？我们来看一下初中和高中课本里对血液是如何描述的：

当然，这只是常规的入门项：全血和生化，还有很多专项检测可以招呼，想了解健康状况，你的血液可以把你出卖个底儿掉。不计成本的话，要不要来个全基因组的测序，你祖上哪里都能挖出来的呦~

在面对癌症这一棘手的敌人时，医生也有很多血清学标志物检测可供参考，但是这些标志物往往比较容易受影响，波动性很大，不具有很好的灵敏性和特异性。而近期大热的liquid biopsy不同于常规的标志物，它所检测的对象，是上述那些检测从未涉及的地方。这得益于科学研究的深入和测序技术的发展，使得我们对血液的了解也越来越深入，让我们从血液中能了解的信息也更多。

【4】瞬间冒出一帮巨额融资的液体活检公司！癌症检测要被颠覆？

不管是哪个患者，一听到“活检”二字，心里总会很有压力。因为这个词出现最多的场景是癌症的诊断。顾名思义，“活检”就是从患者身体上取一部分细胞或者组织，做全面深入的检查，最终确定病情。

实际上，活检已经伴随人类近1000年了。据记载，活检最早是阿拉伯医生Abulcasis（1013-1107）发明的。活检的好处是，允许医生从病灶组织学结构对病情做出判断。当然，随着近几年测序技术的发展，医生还可以给患者组织测序，进而做出更加精确的诊疗。

但是，随着对肿瘤研究的深入，科学家发现在癌症的诊疗中组织活检有一定的局限性。第一，癌症有异质性，对于已经发生转移的癌症患者而言，仅仅取某个部位的癌组织，并不能反映患者整体的情况，但是，对所有的癌组织都取样又不好操作；第二，有些患者自身的情况决定了他不适合组织活检；第三，有些肿瘤在受到手术的扰动之后，有加速转移的风险；第四，即使所有的条件都适宜，组织活检的滞后性对患者的治疗也是不利的。

【5】可能改变癌症治疗的新方法：液体活检

在美国，一种新的血液检测方法正开始改变癌症治疗，为一些病人省去了手术活检和穿刺活检，这两种活检是长期需要来指导病人癌症治疗的。

这种被称为液体活检的检测方法，可以捕获到肿瘤脱落进入血液的肿瘤细胞或DNA，从而替代了从肿瘤本身提取组织。关于这些检测方法的价值，现在还有很多不清楚的地方，但是许多医生认为，这些检测方法是一个很大的进步，可能可以为更多的病人实现个体化治疗。

这些检测方法是第一次非介入性地，可重复性地抽取肿瘤样本，医生们从而可以建立基因表达谱，靶向突变用药，快速判断治疗是否有效，及随肿瘤的发展而调节治疗方案。

【6】“液体活检”可以让医生随时监测癌症治疗效果

对于一般的肿瘤活检，医生需要对患者肿瘤进行切片。但研究人员正在尝试一种新的创新方式，被称为“液体活检”。这是一项血检技术(在患者血液中寻找肿瘤DNA的微小片段)，虽然近期才变得可行，但已经展示出极大潜力。

只需通过简单的一滴血(与传统的活检或CT扫描相比，给患者带来的负担更小)，肿瘤学家就能快速确定一项治疗方案是否适合患者。如果适合，还可以继续监测该治疗方案在癌细胞产生耐药性之后的效果。如果治疗方案无效，可以立即放弃，避免患者遭受副作用之苦，也可以让医生尽早尝试替代方案。

【7】Nat Med：新型液体活检技术为开发小细胞肺癌的新型疗法提供希望

近日，刊登在国际杂志Nature Medicine上的一篇研究论文中，来自英国曼彻斯特理工学院的研究人员通过研究揭示如何利用肺癌病人的血液样本来监测和预测患者对疗法的反应，相关研究为后期研究人员开发治疗癌症患者的个体化疗法提供了一定思路，也为更好地理解肿瘤如何对药物产生耐受性提供了一定的研究依据。

小细胞肺癌(SCLC)是一种生存率较低的恶性癌症，目前临床上急需有效的治疗方法；在许多患者个例中，患者都不能通过手术进行治疗而且活检组织很难得到。这项研究中研究人员利用循环中的肿瘤细胞来以微创的方式调查研究患者的疾病，研究者通过将过打破肿瘤中的癌细胞以及血液中循环的癌细胞来对患者的疾病进行研究。

【8】Sci Transl Med：“液体活检”可捕捉癌性突变

国际著名杂志Science Translational Medicine在线刊登的一项新的研究报告中指出，一种新的基因测序技术可能比用传统的肿瘤活检来发现癌性突变更安全及廉价。

这种叫做"TAm-Seq"的技术可通过收集血浆中循环的DNA片段，放大那些与癌症相关联的DNA部分并深入挖掘基因序列来发现那些难以辨认的突变。

Tim Forshew及其同事分析了来自于一组晚期卵巢癌症病人的肿瘤样本并发现，有67%的病人带有肿瘤抑制基因TP53的突变。

【9】液态活检预测前列腺癌耐药性，NGS助力探讨分子机制

《科学转化医学》杂志上的一则研究表明，利用下一代测序可评估前列腺癌患者血液中雄激素受体（AR）基因的变化，有助于解释去势难治性前列腺癌对雄性激素的抵抗性。

11月4日《科学转化医学》杂志上的一则研究表明，利用下一代测序可评估前列腺癌患者血液中雄激素受体（AR）基因的变化，有助于解释去势难治性前列腺癌对雄性激素的抵抗性。

该研究由意大利特兰托大学及伦敦癌症研究中心研究人员主导，研究对象为97个病理。研究人员发现接受abiraterone治疗之前AR基因未改变的患者生存期明显长于AR基因发生改变的患者，同时研究人员发现患者对药物的抵抗性与两个突变位点有关。

尽管前列腺癌最初可以采取去势治疗，但大多数患者最终会发展为去势难治性前列腺癌，这些患者通常会使用抑制AR基因的药物来治疗，但这些药物并不能治愈癌症且患者会在一年内产生抗药性。

【10】科学家利用ctDNA的液态活检或开发出晚期乳腺癌治疗药物

近日，科学家发明了一种相当灵敏的血液测试，可以用于乳腺癌患者的激素治疗，并经研究证实该种血液诊断可以用于指导更加深层次的治疗。

该方法可以对乳腺癌标志物进行早期诊断，尤其是衡量乳腺癌雌激素水平的(ER)-阳性乳腺癌的诊断。该研究由英国癌症学会（The Institute of Cancer Research，ICR）和NHS基金会共同完成。

研究人员对171名女性雌激素受体阳性乳腺癌患者的血液样本并设置三个独立组患者进行结果验证，并采用数字PCR技术进行检测，发现转移性乳腺癌肿瘤中的ESR1基因容易出现基因突变，尤其是在当女性接受激素治疗后，一旦ESR1基因突变，突变的癌细胞将在体内成倍增加，并成为主导类型——即使得驱动突变变得更加积极和迅速。

（本文转载自生物谷）

2013年的诺贝尔生理学医学奖授予美国科学家詹姆斯·罗斯曼、兰迪·谢克曼和德国科学家托马斯·苏德霍夫，以表彰他们在发现细胞囊泡运输系统及其运行调节机制研究中做出的杰出贡献。这种细胞外囊泡样结构就是外泌体。

外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体，可通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成多泡内涵体，内涵体与细胞膜融合后释放其中的小囊泡。外泌体的直径为40-110 nm，包含RNA、蛋白质、microRNA、DNA片段等多种成分，在血液、唾液、尿液、脑脊液和母乳等多种体液中均有分布。其实，外泌体从发现至今已有30多年的历史，最初被认为是细胞的“垃圾”，此后发现，外泌体是具有功能活性并可进行细胞间信息传递的分泌微囊泡。

研究发现，抗原提呈细胞分泌的外泌体可以刺激T细胞的体外增殖和诱导体内的抗肿瘤免疫反应。从肿瘤细胞中分泌出的包含肿瘤抗原的外泌体则可以通过APC交叉呈递给细胞毒性T淋巴细胞，使其产生肿瘤杀伤作用。因此，外泌体作为一种潜力巨大的肿瘤疫苗，得到了广泛研究。然而，有学者发现肿瘤细胞来源的外泌体对肿瘤生长具有促进作用。一项研究报道，给予预先种植卵巢癌细胞的小鼠腹腔注射从卵巢癌患者腹腔积液中分离出的外泌体，可以明显促进小鼠腹腔内肿瘤的生长。目前，已有越来越多的学者开始关注外泌体在肿瘤发生和发展中的作用及其机制。

１.外泌体介导肿瘤细胞的增生和干性形成

肿瘤细胞通过与自身微环境的信息交流促进肿瘤细胞的增殖和侵袭，而外泌体可以充当这种信息载体。当细胞中出现基因突变时，外泌体会通过膜融合把这种突变信息传递至其他的正常细胞，从而导致原癌基因的激活、抗凋亡基因的表达以及锚定非依赖性生长能力的增加，使肿瘤细胞获得增生的特性。肿瘤细胞来源的外泌体通过直接抑制免疫细胞，或调节相关细胞因子的表达等途径，促进肿瘤细胞的免疫逃逸，为肿瘤细胞在体内生长创制条件。

2. 外泌体介导肿瘤微环境中血管的形成

外泌体能将自身的细胞因子释放到细胞外，作用于内皮细胞膜表面受体，导致血管形成并促进肿瘤的迁移。肿瘤细胞来源的外泌体中含有血管生长素，纤维母细胞生长因子、血管内皮生长因子等细胞因子，这些细胞因子以不同的作用方式促进肿瘤血管的形成，如VEGF通过激活磷酸酯酶C和第二信使的形成，促进血管内皮细胞的有丝分裂，可诱导纤维蛋白溶解酶原活化物的表达，使得细胞外蛋白质水解、基底膜的降解，从而促进血管内皮细胞的迁移和增生等。

3. 外泌体介导肿瘤细胞的免疫耐受

肿瘤细胞来源的外泌体本身可作为肿瘤抗原，同时也能将肿瘤抗原呈递至抗原递呈细胞，从而引起抗肿瘤免疫应答反应，因此，肿瘤来源的外泌体既是一种抗原呈递系统，同时也是肿瘤排斥抗原的来源。肿瘤来源的外泌体能传递某些抑制信号，在机体免疫应答过程中起负性调节作用，诱导肿瘤细胞形成免疫耐受。

4. 外泌体介导肿瘤细胞的化疗抵抗

化疗即利用化学药物抑制肿瘤细胞生长繁殖、杀死肿瘤细胞的一种治疗方式。但在肿瘤的治疗中经常会出现化疗抵抗，外泌体以多种作用参与了化疗抵抗这一过程。通常，发生上皮-间质转化(EMT)的肿瘤细胞可获得抵抗凋亡能力，而抵抗凋亡通常使肿瘤表现为化疗抵抗。肿瘤细胞来源的外泌体能通过传递相关的组织因子(如VEGF、TGF2β)介导细胞发生EMT，从而增加肿瘤细胞的化疗抵抗能力。同时，外泌体介导的胞内药物排斥反应，也是肿瘤化疗治疗的瓶颈。

5. 外泌体组分中的miRNA在肿瘤中的应用

miRNA是一类内源性具有调控功能的非编码RNA，可以与靶mRNA的3’非翻译区结合，从而导致靶基因不同程度的差异性表达。当miRNA运送到远端细胞时外泌体可以保持miRNA的完成性。此外，外泌体中miRNA的分泌常用于肿瘤的诊断。

总之，外泌体在肿瘤发生发展中有重要作用，作为肿瘤调控的新机制，为癌症治疗提出了新的思路。此外，着眼于外泌体与质膜构造十分相似，可将其作为许多治疗性的药物的运输载体而运用于再生医学方面。

（本文转载自生物谷）